Від мономера AEEA до димера

Співвідношення ліків до антитіл (DAR) є ключовим атрибутом якості лікарських засобів, кон’югованих з антитілами (ADC), який безпосередньо впливає на ефективність і токсичність. Ідеальний DAR зазвичай становить 2-4, але багато ефективних корисних навантажень, таких як MMAE і DM1, мають сильну гідрофобність. При використанні коротколанцюгових або одноланцюгових лінкерів PEG DAR, що перевищує 4, призводить до прискореної агрегації та кліренсу антитіл. Запровадження AEEA-AEEA забезпечує ефективне вирішення цієї проблеми.
Порівняно з одним компонувальником AEEA,AEEA-AEEAподвоює довжину ланцюга ПЕГ і має більшу гідрофільність. Кожна димерна одиниця забезпечує 4 ефірні та 2 амідні зв’язки, які можуть зв’язувати більше молекул води та утворювати більш щільний шар гідратації. Коли кілька гідрофобних препаратів з’єднані з поверхнею антитіл через AEEA-AEEA, шар гідратації може ефективно захищати гідрофобні взаємодії між препаратами та запобігати агрегації антитіл. Експериментальні дані показують, що ADC, створені за допомогою AEEA-AEEA, зберігають колоїдну стабільність (швидкість агрегації<5%) even when DAR reaches 6-8, while the control using single AEEA shows significant precipitation when DAR>4.
Стратегія регулювання DAR стосується попереднього зв’язування AEEA-AEEA з лікарським засобом за допомогою технології направленого зв’язування, а потім реакції зі сконструйованим цистеїном на антитілі. Шляхом регулювання молярного співвідношення лінкерного препарату до антитіла (зазвичай від 3:1 до 10:1) можна точно контролювати значення DAR. Наприклад, надлишок у 2-рази може дати продукт DAR2, надлишок у 4-рази може дати DAR4, а надлишок у 8 разів може отримати продукт DAR6-8. HIC-HPLC або мас-спектрометрія можуть точно визначити розподіл DAR. Для пухлинних показань, що вимагають високого навантаження, таких як рак молочної залози з низькою експресією HER2 і дрібноклітинний рак легенів, AEEA-AEEA робить можливим високий DAR і значно покращує ефект знищення пухлини. Доклінічні дослідження показали, що ADC DAR6 збільшує швидкість інгібування пухлини приблизно на 40% порівняно з ADC DAR4 у тій же дозі, без значного збільшення токсичності.